Fesselungsstress bei hypertensiven Ratten aktiviert die Darmmakrophagen und reduziert die Darmbarriere, begleitet von einer Dysbiose der Darmflora
Beurteilung der Barrierefunktion des Dickdarms
Das Kolongewebe wurde entlang der Mesenterialgrenze geöffnet und in Ussing-Kammern (Physiologic Instruments, San Diego, CA) montiert, wobei eine 0,5 cm 2 große Fläche der Gewebeoberfläche 5 ml VO 2 /V CO 2 95:5 Krebs-Glucose (10 mM) bei 37 °C ausgesetzt wurde. Nach 20-minütiger Anpassung wurden Tetrodotoxin (TTX, 0,1 μM, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., Shanghai, China) und Indomethacin (Indo, 1 μM, Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, MO, USA) auf der basalen Seite hinzugefügt, um enterische Neuronen und Prostaglandinsynthase zu hemmen, und die Abschnitte ließen sie mindestens 30 Minuten lang einen Steady-State-Level erreichen, bevor jedes Experiment begann.
Der parazelluläre Weg und der transzelluläre Weg wurden als Fluss von 4-kDa-FITC-Dextran (FD-4; 0,5 mg/ml; Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, MO, USA) bzw. Meerrettichperoxidase (HRP; 0,5 mg/ml; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Peking, China) gemessen. FD-4 und HRP wurden der luminalen Seite hinzugefügt und die Proben von 400 μl wurden 2 Stunden lang alle 20 Minuten von der basolateralen Seite entnommen und durch ein gleiches Volumen des entsprechenden Puffers ersetzt. Die Konzentration von FD-4 wurde mithilfe der Fluoreszenz bei Emission 528 nm und Anregung 485 nm gemessen. 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidin (TMB) wurde verwendet, um HRP bei Absorption 405 nm zu erkennen. 18
Statistische Analyse
Die Daten wurden als Mittelwert ± SEM unter Verwendung von Prism 8.0 ausgedrückt, und der nichtparametrische Wilcoxon-Test (Zwei-Gruppen-Vergleich) oder der Kruskal-Wallis-Test (Mehr-Gruppen-Vergleich) wurden verwendet, um die Signifikanz zwischen verschiedenen Behandlungsgruppen zu bestimmen. N war die Anzahl der Tiere in jedem Experiment. Die statistischen Unterschiede zwischen Kontroll- und Behandlungsgruppen wurden, wenn angemessen, mit Student's gepaartem oder ungepaartem t -Test analysiert.
Die Korrelation zwischen den Plasmazytokin- und Hormonkonzentrationen für alle y-WKY-, y-WKY-S-, y-SHR- und y-SHR-S-Tiere wurde mithilfe von Pearson-Korrelationskoeffizienten ermittelt und die p-Werte zwischen den Gruppen mithilfe des gepaarten Mann-Whitney-Tests verglichen. Die Korrelationsmatrizen wurden auch als schematische Korrelogramme angezeigt. 19 , 20 Da die Messwerte dieser Zytokine und Hormone stark variieren, wurde die mehrfache Änderung ihres Niveaus relativ zum Referenzniveau für die folgende dynamische Analyse verwendet, wobei die Dynamik durch lokal gewichtete Streudiagramm-Glättung (LOWESS) an die Änderungsfalten entlang der Zeitachse angepasst wurde. Die durch Ausprobieren ermittelte Bandbreite (der wichtigste Parameter) beträgt 0,3. Alle statistischen Analysen wurden in Stata/SE 12 und dem Open-Source-Verfahren R 3.2 ( https://www.r-project.org/ ) durchgeführt. 21