Ussing-Kammer: Der vollständige Leitfaden (Prinzipien, Protokolle, Fehlerbehebung & Produktauswahl)
Dieser praktische Leitfaden erklärt, wie Ussing-Kammern den epithelialen Transport quantifizieren, reproduzierbare Kurzschlussstrom- (SCC) und TEER-Arbeitsabläufe ermöglichen und Ihnen bei der Auswahl des richtigen Systems von Physiologic Instruments für konsistente Daten in Publikationsqualität helfen.
Was ist eine Ussing-Kammer?
Eine Ussing-Kammer misst den transepithelialen Ionentransport durch Zell- oder Gewebepräparate, indem sie eine Spannung anlegt und den Strom aufzeichnet ( SCC ) oder indem sie den Widerstand misst ( TEER ).
Hinter den wissenschaftlichen Grundlagen: Im SCC-Modus wird das Gewebe auf 0 mV gehalten und der Verstärker injiziert einen Strom, der dem nativen transepithelialen Potenzial entgegenwirkt; dieser injizierte Strom ist proportional zum Ionentransport.
Kernkomponenten
Kammern & Schieber
Gewebe/Einlagen festhalten und Öffnung und Volumen definieren.
Elektroden
Ag/AgCl-Spannungsmess- und Stromleitpaare.
Verstärker / Klemme
Mehrkanalsteuerung für SCC/TEER.
Perfusion und Erwärmung
Temperatur, Gasaustausch und Lösungsaustausch aufrechterhalten.
Wann verwendet man eine Ussing-Kammer?
- CFTR- und ENaC-Funktionsstudien
- Barrierenintegrität mittels TEER
- Arzneimitteltransport und Permeabilität
- Zeit- und Dosis-Wirkungs-Kinetik
Validiertes SCC-Protokoll
- Präparatepuffer und Elektroden
- Gewebe anbringen, auf Dichtheit prüfen.
- Klemmen Sie bei 0 mV , zeichnen Sie SCC auf
- Anwendungssequenz: Amilorid → cAMP-Agonist → Inhibitor
- Qualitätskontrolle und Datenexport
Schneller TEER-Workflow
- Wenden Sie einen kleinen V-förmigen Schritt an.
- Berechne R = ΔV / ΔI, flächenkorrigiert
- Trend TEER im Laufe der Zeit
Checkliste zur Datenqualität
- Angepasste Elektroden
- Stabile Temperatur
- Keine Blasen, die die Öffnung passieren
- Frische Reagenzien, angepasste Osmolaritäten
Fehlerbehebungsmatrix
| Symptom | Wahrscheinliche Ursache | Fix |
|---|---|---|
| Instabile Ausgangslage | Offsets/Blasen | Elektroden neu einsetzen, Entgasungspuffer |
| Niedriges Signal-Rausch-Verhältnis | Erdungsprobleme | Erdungs-/Leitungsführung verbessern |
| Kein inhibitorempfindlicher Strom | Reagenz-/Sequenzfehler | Reihenfolge und Konzentrationen prüfen |
Produktauswahl
| Anwendungsfall | System | Vorteile | Link |
|---|---|---|---|
| Zellmonolagen | EM8-C EasyMount | Breites Kompatibilitätsspektrum | Sicht |
| Geringe Mengen | EM8-LV | Schnellere Äquilibrierung | Sicht |
| Rattengewebe | EM8-R | Spezialwerkzeuge | Sicht |
| 8-Kanal | VCC MC8 Klemme | Parallel SCC/TEER | Sicht |
Häufig gestellte Fragen
Welche Blendenöffnung sollte ich wählen?
Passen Sie die Apertur an die Gewebedicke und den Strom an.
Wie kann ich ein Abdriften vermeiden?
Temperatur stabilisieren, Blasenbildung vermeiden, Gleichgewicht herstellen.
Kann ich SCC und TEER auf derselben Präparation durchführen?
Ja, SCC unter Klemmung und Puls für TEER durchführen.
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Empfohlene Ausrüstung für diese Forschung
| Ausrüstungskategorie | Beschreibung | Link |
|---|---|---|
| Ussing Chamber Systems | Komplette elektrophysiologische Plattformen für Studien zum epithelialen Transport und zur Barrierefunktion. | Ussing Chamber Systems |
| Verwendung von Kammern (EasyMount & Classic) | Separate Kammern für Darm, Atemwege, Nieren und kundenspezifisches Gewebe. | Ussing Chambers |
| Verwendung von Kammerschiebereinsätzen | Präzisions-Acryl-Schieber zur Montage von Gewebeproben und zur Nachbildung experimenteller Geometrien. | Verwendung von Kammerschiebereinsätzen |
| Spannungs-/Stromzangen (VCC MC8-Serie) | Spannungsklemmverstärker für CFTR-Assays, TEER und transepitheliale Messungen. | Spannungsklemmen |
| Software erwerben und analysieren | Software zur Datenerfassung und -analyse für elektrophysiologische Experimente an Epithelzellen. | Erfassen und Analysieren |