Come funzionano le camere di Ussing? Una guida passo passo
Come funzionano le camere di Ussing? Una guida passo passo al sistema di camere di Ussing EasyMount
Le camere di Ussing sono strumenti essenziali nella ricerca fisiologica e farmacologica , consentendo agli scienziati di studiare il trasporto ionico, la funzione barriera e la permeabilità dei farmaci attraverso i tessuti epiteliali. Che si tratti di studi sull'assorbimento intestinale, sulla fibrosi cistica o sui test farmacologici , un sistema di camere di Ussing ben progettato, come il sistema EasyMount , può semplificare gli esperimenti, migliorare la riproducibilità e ottimizzare i risultati.
In questo articolo analizzeremo il funzionamento di una camera di Ussing dall'inizio alla fine , includendo:
✅ Come ottenere un campione di tessuto intestinale
✅ Come preparare una coltura cellulare per gli esperimenti nella camera di Ussing
✅ Procedure di installazione passo passo per il sistema EasyMount
✅ Raccolta e analisi dei dati
✅ Pulizia e manutenzione adeguate
1. Che cos'è una camera di Ussing?
Una camera di Ussing è un dispositivo che consente ai ricercatori di studiare i meccanismi di trasporto attraverso i tessuti epiteliali . È composta da due compartimenti, separati da un campione di tessuto epiteliale o da un monostrato di coltura cellulare. Questi compartimenti consentono la misurazione precisa del flusso ionico, della resistenza elettrica transepiteliale (TEER) e della corrente di cortocircuito (Isc), tutti parametri cruciali per valutare l'integrità della barriera e il trasporto attivo.
Il sistema EasyMount Ussing Chamber migliora questo design classico offrendo:
✔ Montaggio dei tessuti rapido e intuitivo
✔ Controllo integrato della temperatura e del gas
✔ Capacità di elevata produttività per più camere
✔ Misurazioni elettrofisiologiche accurate e riproducibili
2. Ottenimento e preparazione di un campione di tessuto intestinale
Per i ricercatori che studiano l'assorbimento dei nutrienti, la permeabilità dei farmaci o i modelli di malattia , ottenere un campione di tessuto intestinale vitale è il primo passo fondamentale.
Procedura dettagliata per il prelievo del tessuto intestinale:
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Selezione degli animali:
- In genere, gli intestini vengono raccolti da roditori (ratti/topi), maiali o altri modelli . È necessario garantire l'approvazione etica e seguire le linee guida istituzionali per l'uso sugli animali.
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Dissezione dei tessuti:
- Subito dopo l'eutanasia, rimuovere l'intestino tenue.
- Per mantenerne la vitalità, immergere il tessuto asportato in una soluzione di Ringer ossigenata e ghiacciata .
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Preparazione dei tessuti:
- Tagliare l'intestino nel senso della lunghezza.
- Rimuovere delicatamente il muco e il tessuto connettivo in eccesso.
- Utilizzare un punzone o un bisturi per tagliare una sezione circolare o rettangolare adatta alla camera EasyMount.
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Montaggio del tessuto nel sistema EasyMount:
- Fissare il tessuto tra le metà della camera, assicurando una tenuta stagna .
- Riempire entrambi i compartimenti con tampone fisiologico ossigenato.
- Avviare la regolazione della temperatura e del gas per mantenere le condizioni fisiologiche .
3. Preparazione delle colture cellulari per gli esperimenti nella camera di Ussing
Se si utilizzano colture cellulari anziché campioni di tessuto, seguire questi passaggi:
Procedura passo passo per la preparazione della coltura cellulare:
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Selezione delle celle:
- Utilizzare linee cellulari epiteliali come Caco-2 (intestinale), Calu-3 (polmone) o MDCK (rene) , che formano monostrati compatti.
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Semina e crescita:
- Coltivare le cellule su inserti semipermeabili (ad esempio, piastre Transwell).
- Lasciare che le cellule si differenzino per 14-21 giorni , assicurando la corretta polarizzazione e la formazione di giunzioni strette.
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Trasferimento alla camera EasyMount:
- Posizionare con cautela l' inserto per la coltura cellulare nella camera.
- Aggiungere soluzioni tampone sia al compartimento apicale che a quello basolaterale.
- Avviare le procedure sperimentali.
4. Configurazione del sistema EasyMount Ussing Chamber
La camera di Ussing EasyMount è progettata per un'installazione rapida ed efficiente , il che la rende ideale per studi ad alta produttività.
Procedura di installazione passo dopo passo:
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Preparare la camera:
- Assicurarsi che tutti i componenti siano puliti e assemblati correttamente.
- Attivare il controllo della temperatura e il flusso del gas (95% O₂/5% CO₂ per condizioni fisiologiche).
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Inserire la coltura tissutale o cellulare:
- Fissare il campione di tessuto o l'inserto per la coltura cellulare tra le metà della camera.
- Verificare la corretta tenuta per evitare perdite.
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Aggiungere soluzioni tampone:
- Riempire sia il compartimento apicale che quello basolaterale con soluzione di Ringer ossigenata.
- Mantenere una miscelazione costante utilizzando gli agitatori magnetici integrati.
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Inserire gli elettrodi:
- Posizionare nella camera gli elettrodi di rilevamento della tensione e di passaggio della corrente.
- Calibrare gli elettrodi per garantire letture elettrofisiologiche accurate .
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Inizia la raccolta dati:
- Misurare il TEER basale e la corrente di cortocircuito (I<sub>sc</sub>) per confermare la vitalità del tessuto.
- Introdurre composti di prova, farmaci o ioni per osservare le dinamiche di trasporto.
5. Pulizia e manutenzione del sistema EasyMount
Una pulizia adeguata è essenziale per mantenere l'integrità dei dati e prolungare la durata del sistema .
Protocollo di pulizia passo dopo passo:
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Rimuovere gli inserti di tessuti o colture cellulari:
- Smaltire correttamente i fazzoletti usati.
- Risciacquare i componenti della camera con acqua deionizzata.
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Disinfettare la camera:
- Immergere in un disinfettante non corrosivo (ad esempio, una soluzione di etanolo al 70% o di perossido di idrogeno) .
- Evitare l'uso di sostanze chimiche aggressive che potrebbero danneggiare gli elettrodi.
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Elettrodi e tubi di lavaggio:
- Sciacquare accuratamente gli elettrodi con acqua distillata per evitare l'accumulo di sale.
- Conservare gli elettrodi in un'apposita soluzione di conservazione .
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Asciugare e conservare correttamente:
- Lasciare asciugare completamente i componenti all'aria prima di rimontarli.
- Conservare il sistema in un ambiente privo di polvere per evitare contaminazioni.
Conclusione
Il sistema EasyMount Ussing Chamber è uno strumento avanzato per studiare il trasporto epiteliale e la funzione di barriera con facilità ed efficienza senza pari . Che si utilizzino campioni di tessuto intestinale o monostrati epiteliali coltivati , il sistema EasyMount semplifica la configurazione, garantisce misurazioni accurate e semplifica la pulizia post-esperimento .
Seguendo i passaggi descritti in questa guida, i ricercatori possono massimizzare la qualità dei dati, migliorare la riproducibilità e ottimizzare l'efficienza sperimentale .
Pronti a dare una svolta alla vostra ricerca? Scoprite come il sistema EasyMount Ussing Chamber può rivoluzionare gli studi sul trasporto epiteliale del vostro laboratorio!