限制应激在高血压大鼠中激活肠道巨噬细胞并削弱肠屏障，伴随肠道菌群失调
结肠屏障功能评估
结肠组织沿肠系膜边缘剪开，并安装在Ussing小室中（Physiologic Instruments，美国加利福尼亚州圣地亚哥），暴露面积为0.5 cm²，组织表面暴露于5 mL 95% O₂/5% CO₂通气的Krebs-葡萄糖缓冲液（10 mM）中，温度维持在37 °C。适应20分钟后，分别在基底侧加入河豚毒素（TTX，0.1 μM，上海阿拉丁生化科技有限公司，上海，中国）和消炎痛（Indo，1 μM，Sigma-Aldrich公司，美国密苏里州圣路易斯），以抑制肠神经元和前列腺素合酶。在开始实验前，组织需保持至少30分钟的稳态状态。
旁细胞通路和跨细胞通路的通透性分别通过4 kDa FITC-葡聚糖（FD-4；0.5 mg/mL；Sigma-Aldrich公司，美国）和辣根过氧化物酶（HRP；0.5 mg/mL；北京索莱宝科技有限公司，北京，中国）的通量进行测量。FD-4和HRP加入至腔道侧（顶端），并从基底侧每20分钟收集400 μL样本，持续2小时，同时补充等体积相应缓冲液。
FD-4浓度通过荧光法检测（激发波长485 nm，发射波长528 nm）；HRP浓度使用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺（TMB）进行检测，在405 nm波长下测定吸光度【18】。
统计分析
所有数据以平均值 ± 标准误（mean ± SEM）表示，使用Prism 8.0软件进行处理。使用Wilcoxon秩和检验（两组比较）或Kruskal–Wallis检验（多组比较）分析不同处理组间的统计学显著性。N表示每组实验中动物的数量。对照组与处理组之间的统计差异在合适情况下使用Student’s配对或非配对t检验进行分析。
对所有y-WKY、y-WKY-S、y-SHR和y-SHR-S动物的血浆细胞因子与激素浓度之间的相关性使用Pearson相关系数分析，并通过配对的Mann-Whitney检验比较各组之间的p值。相关性矩阵通过相关图（correlogram）形式进行可视化展示【19,20】。
由于各细胞因子和激素的测量范围差异较大，后续动态分析中采用其相对于参考水平的倍数变化（fold change）。动态变化通过局部加权散点平滑（LOWESS）方法进行拟合，所用带宽（最关键参数）为0.3，依据经验试验确定。所有统计分析使用Stata/SE 12和开源R 3.2程序（https://www.r-project.org/）完成【21】。