Von der Biopsie zum Labor: Ein Leitfaden für PI zur reproduzierbaren ICM mit dem EasyMount P2400

Eine neue polnische Pilotstudie zeigt, wie die Messung des intestinalen Stroms (ICM) in Rektumbiopsien mit dem EasyMount® Low-Volume Ussing System P2400 und dem P2407B-Schieberegler durchgeführt wird. Sie bietet eine Blaupause, der PIs folgen können, um hochpräzise CFTR-Messwerte für CF-, CRMS/CFSPID- und gesunde Kohorten zu generieren. Link zum Artikel: https://www.mdpi.com/2077-0383/14/17/6020

Wichtige Erkenntnisse (für Laborleiter):

• Die Autoren haben ECFS DNWG SOP v2.7 implementiert und ausdrücklich über die Hardware EasyMount P2400 + P2407B berichtet – hervorragend hinsichtlich der Reproduzierbarkeit der Methode und der Transparenz der Ausrüstung.

• Ihr Arbeitsablauf legte enge Zeitfenster für die Handhabung fest: 10–20 Minuten von der Biopsie bis zur Montage; Vorinkubation bei 37 °C , Lebensfähigkeitsschwelle Rt > 10 Ω·cm² ; und eine definierte Stimulanziensequenz (Amilorid → IBMX/Forskolin → Carbachol → Genistein → DIDS → Histamin).

• Der kumulative ΔIsc nach Carbachol + IBMX/Forskolin + Histamin unterschied CF deutlich von CRMS/CFSPID und gesunden Kontrollpersonen und unterstützte den diagnostischen Wert von ICM, wenn der Chloridgehalt im Schweiß nicht eindeutig ist.

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Der reproduzierbare ICM-Entwurf (direkt auf das Papier rückführbar)

Hardware und Umgebung

• Kammer: EasyMount Low-Volume Ussing System P2400 (Physiologische Instrumente)

• Schieberegler: P2407B (für kleine Rektumbiopsien)

• Temperatur: Vorinkubationskammern bei 37 °C

• Spannungsklemme: Messen Sie PD, Isc und Rt gemäß SOP v2.7

Probenhandhabung und -zeitpunkt

• Rektale Biopsieentnahme: ≥3–4 Fragmente pro Patient mit 2,3 mm Einwegpinzette

• Transport: sofort in eiskaltes PBS

• Montagefenster: 10–20 Minuten vom Beginn der Biopsie bis zum Beginn des Experiments

• Basislinie: nach ~5 Minuten Vorinkubation PD_basal, Isc_basal, Rt_basal aufzeichnen

• Lebensfähigkeit: Antworten nur einschließen, wenn das Gewebe intakt ist und Rt > 10 Ω·cm²

Reizfolge (Schleimhaut/Serosal wie angegeben)

• Amilorid (100 µM) → IBMX (10 µM) + Forskolin (100 µM) → Carbachol (100 µM) → Genistein (50 µM) → DIDS (200 µM) → Histamin (500 µM)

• Berechnen Sie die kumulative Sekretion (z. B. Carbachol + IBMX/Forskolin + Histamin) für Gruppenvergleiche.

Ergebnisse, die das Setup beheben kann

• Kumulative ΔIsc (Carbachol + IBMX/Forskolin + Histamin):

  • CF: 15,32 ± 15,47 µA/cm²

  • CRMS/CFSPID: 86,84 ± 37,84 µA/cm² (p < 0,001 vs. CF)

  • Gesunde Kontrollen: 80,16 ± 48,54 µA/cm² (p = 0,005 vs. CF)
    → Praktische Implikation: Stärkung zukünftiger Studien rund um kumulative Reaktionen; diese Kombinationen sind für CF gegenüber Nicht-CF äußerst diskriminierend.

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Transparenz der Ausrüstung (und wo sie zu finden ist)

In der Studie werden das EasyMount P2400 Ussing-System und der P2407B- Schieber explizit genannt. Diese kleinvolumige Architektur trägt dazu bei, Reagenzien zu sparen und kleine Gewebe zu stabilisieren – Vorteile bei der Arbeit mit pädiatrischen Biopsien oder teuren Modulatoren.

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Implementierungshinweise für neue ICM-Programme

• Übernehmen Sie ECFS DNWG SOP v2.7 und halten Sie sich an die Zeitfenster des Dokuments. Beides ist für die Reproduzierbarkeit zwischen den Standorten von entscheidender Bedeutung.

• Standardisieren Sie die Schwellenwerte für die Lebensfähigkeit (z. B. Rt > 10 Ω·cm² ) und lehnen Sie Läufe ab, bei denen die Qualitätskontrolle fehlt. Dies war für die Qualität des Datensatzes der Autoren von entscheidender Bedeutung.

• Geben Sie Marke/Modell von Kammern und Schiebern in den Methoden an – dieses Dokument legt die Messlatte für die Offenlegung von Geräten hoch und ermöglicht nachgelagerte Metaanalysen.

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Alle Anerkennung gilt den Autoren

Postek M., Zybert K., Wozniacki L., Woynarowski M., Sands D. Pilot Evaluation of Intestinal Current Measurement in Cystic Fibrosis and CRMS/CFSPID Patients in Poland. Journal of Clinical Medicine. 2025;14(17):6020. Veröffentlicht : 26. August 2025. DOI: 10.3390/jcm14176020. Wir danken dem Team des Mukoviszidose-Zentrums in Dziekanów Leśny für die offene und detaillierte Beschreibung des Protokolls und der Hardware-Auswahl. MDPI