Oligonucleótidos antisentido con omisión de exón para el tratamiento de la fibrosis quística

Las mutaciones en el gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística ( CFTR ) causan fibrosis quística (FQ), y la mutación sin sentido CFTR -W1282X causa una forma grave de FQ. Aunque Trikafta y otras terapias de modulación de CFTR benefician a la mayoría de los pacientes con FQ, falta una terapia dirigida para pacientes con la mutación W1282X. La proteína CFTR-W1282X tiene actividad residual pero se expresa a un nivel muy bajo debido a la desintegración del ARN mensajero (ARNm) (NMD) mediada sin sentido. Se están investigando activamente la terapia de supresión de NMD y la terapia de lectura directa para mutantes sin sentido de CFTR . La supresión de NMD podría aumentar el ARNm de CFTR mutante y las terapias de lectura directa pueden aumentar los niveles de proteína CFTR de longitud completa. Sin embargo, estos enfoques tienen limitaciones y posibles efectos secundarios: debido a que la maquinaria NMD también regula la expresión de muchos ARNm normales, no es deseable una inhibición amplia de la vía y los fármacos de lectura directa son ineficaces en parte porque la plantilla de ARNm mutante está sujeta a NMD. . Para evitar estos problemas, aplicamos una estrategia de oligonucleótido antisentido (ASO) con omisión de exones para lograr la evasión de NMD específica de un gen. Un cóctel de dos ASO dirigidos al sitio de empalme indujo la expresión del ARNm de CFTR sin el exón 23 que contiene el codón de terminación prematura (CFTR-Δex23), que es un exón en marco. El tratamiento de células epiteliales bronquiales humanas con este cóctel de ASO que se dirigen a los sitios de empalme que flanquean el exón 23 da como resultado una omisión eficiente del exón 23 y un aumento de la proteína CFTR-Δex23. El cóctel ASO de cambio de empalme aumenta la corriente de cloruro mediada por CFTR en células epiteliales bronquiales humanas. Nuestros resultados sientan las bases para desarrollar una terapia alélica específica para la FQ causada por la mutación W1282X.