El estrés por restricción en ratas hipertensas activa los macrófagos intestinales y reduce la barrera intestinal acompañado de disbiosis de la flora intestinal

Evaluación de la función de barrera colónica

Se abrió tejido colónico a lo largo del borde mesentérico y se montó en cámaras Ussing (Physiologic Instruments, San Diego, CA) con un área expuesta de 0,5 cm ² de la superficie del tejido a 5 ml de VO ₂ /V CO ₂ 95:5 Krebs-glucosa ( 10 mM) a 37°C. Después de adaptar durante 20 minutos, se agregaron tetrodotoxina (TTX, 0,1 μM, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., Shanghai, China) e indometacina (Indo, 1 μM, Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, MO, EE. UU.). al lado basal, respectivamente, para inhibir las neuronas entéricas y la prostaglandina sintasa y las secciones dejaron que alcanzaran un nivel de estado estable durante al menos 30 minutos antes de cada experimento. comenzó.

La vía paracelular y la vía transcelular se midieron como el flujo de FITC-dextrano de 4 kDa (FD-4; 0,5 mg/ml; Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, MO, EE. UU.) y peroxidasa de rábano picante (HRP; 0,5 mg /mL; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Beijing, China), respectivamente. Se agregaron FD-4 y HRP al lado luminal, y se recogieron muestras de 400 μl del basolateral cada 20 minutos durante 2 h y se reemplazaron por un volumen igual del tampón correspondiente. La concentración de FD-4 se midió usando fluorescencia a una emisión de 528 nm y una excitación de 485 nm. Se utilizó 3,3′,5,5′-tetrametilbencidina (TMB) para detectar HRP a una absorbancia de 405 nm. ¹⁸

Análisis estadístico

Los datos se expresaron como media ± SEM utilizando Prism 8.0, y se utilizó la prueba no paramétrica de Wilcoxon (comparaciones de dos grupos) o Kruskal-Wallis (comparaciones de múltiples grupos) para determinar la importancia entre diferentes grupos de tratamiento. N fue el número de animales en cada experimento. Las diferencias estadísticas entre los grupos de control y de tratamiento se analizaron mediante la prueba t de Student pareada o no pareada, cuando correspondía.

La correlación entre las concentraciones plasmáticas de citoquinas y hormonas para todos los animales y-WKY, y-WKY-S, y-SHR e y-SHR-S se determinó utilizando los coeficientes de correlación de Pearson y los valores de p se compararon entre grupos con Mann-Whitney pareados. ' prueba. Las matrices de correlación también se mostraron como correlogramas esquemáticos. ^{19 , 20} Debido a que cada una de estas citoquinas y mediciones de hormonas varían ampliamente, el cambio múltiple de su nivel en relación con el nivel de referencia se utilizó para el siguiente análisis dinámico, cuya dinámica se ajustó a los pliegues de cambio a lo largo de la línea de tiempo mediante dispersión ponderada localmente. suavizado de trama (BAJO). El ancho de banda (el parámetro más importante) determinado por prueba y error es 0,3. Todos los análisis estadísticos se realizaron en Stata/SE 12 y el procedimiento de código abierto R 3.2 ( https://www.r-project.org/ ). ²¹

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